开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
【研究目的】
吲哚布芬和阿司匹林属于环氧化酶抑制剂,可阻断花生四烯酸代谢生成血栓素,减少血小板聚集以及血管收缩,从而降低血栓发生的风险。P2Y12受体属于血小板表面ADP受体,在血小板聚集过程中发挥重要作用。本课题主要研究吲哚布芬和阿司匹林分别与P2Y12受体拮抗剂联合用药对血小板功能的抑制作用的差别。
【研究方法】
设计两组实验研究吲哚布芬和阿司匹林分别与P2Y12受体拮抗剂联合用药对血小板功能的抑制作用。P2Y12受体拮抗剂采用氯吡格雷和替格瑞洛;由ADP和血栓素类似物(U46619)诱导血小板聚集。每个受试药至少设3个给药浓度,分别进行大鼠体内和体外实验。用血小板聚集仪测定血小板的最大聚集率,通过公式计算出血小板聚集抑制率。
实验一:对ADP、U46619 诱导大鼠体内血小板聚集的抑制作用
雄性SD大鼠,50只,随机分为5组,每组10只。分别为阿司匹林 氯毗格雷活性产物组、吲哚布芬 氯吡格雷活性产物组、阿司匹林 替格瑞洛组、吲哚布芬 替格瑞洛组和模型对照组(给以等容积的0.5%CMC-Na)。每天灌胃给药一次,给药容积为0.5 ml/100g体重,连续给药5天。末次给药后30 min,用3%水合氯醛腹腔麻醉(1mL/100g体重),仰卧固定,剪开颈部皮肤约3cm,用止血钳进行钝性分离,暴露支气管后分离出颈总动脉。细线结扎颈总动脉远心端,再用动脉夹夹闭近心端,进行血管插管后固定。手术结束后打开动脉夹,将血液放入含有3.8%柠檬酸三钠的试管中,使血液与3.8%柠檬酸三钠容积之比为9:1。
将上述制备的抗凝血液混匀后按不同的离心速度制备PRP和PPP。500rpm离心10min后吸取上层血浆即得PRP;将剩余血液3000rpm离心10min后吸取上层血浆即得PPP。
先取300ulPPP加入测试杯中,然后放入测试孔,按“PP”键进行定标。然后取270ulPRP加入测试杯中,在37℃预温槽中预热3 min,放入测试孔后,按“开始”键时立即加入诱导剂30ul(ADP终浓度10uM,U46619终浓度3uM),以测定最大聚集率。
公式如下:
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