一、拟研究或解决的问题
氧化应激是众多疾病发生的病理生理基础,机体通过Nrf2-ARE通路介导多种抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶来减少有毒物质的损伤。研究表明动脉粥样硬化、糖尿病、缺血/再灌注、癌症等均与氧化应激有关。报告基因(reportergene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,因此可以用做快速筛选作用于目的基因或其调控序列的药物。
甘草来源于豆科(Leguminosae)甘草属(Glycyrrhizin)植物乌拉尔甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)、胀果甘草(GlycyrrhizainflateBat.)或光果甘草(GlycyrrhizaglabraL.)的干燥根及根茎。现代化学和药理学研究表明甘草的主要有效成分是黄酮类和三萜皂苷成分,其中黄酮类化合物300多种,具有抗癌、抗衰老、改善心血管系统等重要的药理作用,且都有较好的抗氧化活性。通过文献查找甘草查尔酮E、去氢粗毛甘草素、异甘草素可以激活Nrf2-ARE通路发挥神经保护作用,但其作用机制及其它黄酮类化合物抗氧化作用研究较少。由于甘草中化学成分多且含量差异较大,因此建立一种好的筛选方法,是从众多化合物中快速筛选出Nrf2-ARE激活剂并在抗氧化方面进一步研究的重要问题。
本研究拟用LC-TOF/MS对甘草提取物的定性分析,并用瞬时转染和荧光素酶/beta;-半乳糖苷酶报告基因系统,构建一个可用来筛选各种天然产物和单体化合物的细胞模型。运用此模型从甘草中快速筛选出激活抗氧化通路Nrf2-ARE的有效化学成分,并进行细胞毒性测试。为今后研究其在抗辐射、抗癌、调节细胞周期和细胞的增殖分化、抑制细胞凋亡等药理活性的机制及发现新的抗氧化单体等方面打下基础。
二、采用的研究手段
1.使用LC-TOF/MS对甘草提取物的定性分析;
2.构建瞬时转染和荧光素酶/beta;-半乳糖苷酶报告基因系统,用来筛选天然产物和单体化合物。
3.从甘草中快速筛选出激活抗氧化通路Nrf2-ARE的有效化学成分,并进行细胞毒性测试。
三文献综述
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