一、拟研究的问题
胰岛素是体内调节能量代谢和糖代谢的重要激素,是治疗糖尿病的特效药物之一。目前,基因工程人胰岛素的临床应用正在迅速增加,但如何提高人胰岛素的表达产量仍然是科研中的研究的重点。
二、研究目标、采用的手段
u 研究目标:
本研究旨在克隆人胰岛素基因,构建表达效率高、表达产物便于加工的产胰岛素毕赤酵母工程菌株,为低成本生产胰岛素探索一条新的途径。
u 研究手段:
采用基因工程的手段,设计一个新分子,并将新分子插入表达载体中,构建表能高效分泌表达的载体,从而提高重组药物的产量。本研究我们将采用巴斯德毕赤酵母作为表达载体。
三、文献综述
摘要:通过已有文献报道并根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母密码子偏爱性,采用基因半合成技术合成人胰岛素基因,将合成的胰岛素基因克隆到pPic3.5K质粒上,通过菌落PCR筛选阳性克隆,构建毕赤酵母重组表达载体。对获得的高效表达菌株进行诱导获取最佳诱导时间,并进行发酵培养,从而为工业化生产人胰岛素提供新的线索和方法。
引言:影响重组人胰岛素的菌株表达产量的因素有很多,为此人们也设计了大量的实验,包括基因的优化,胰岛素前体的代谢研究,拷贝数对胰岛素前体表达的影响,表达载体的选用,以及最佳培养条件等,这些研究也表明高效表达的问题十分复杂,并没有完全得到解决。本文将从以下几个方面概述提高表达产量的策略。
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