开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
课题背景:
中药鹿角胶的药用历史十分悠久,始载于2000多年前的《神农本草经》,并被列为上品,别名白胶或鹿胶[1],是我国传统的名贵中药材。
鹿角胶是由鹿角,也就是鹿科动物马鹿或梅花鹿的已骨化的角或锯茸后第二年春季脱落的角基,经水煎煮、浓缩制成的固体胶。主要呈扁方片状,黄棕色或红棕色,半透明,有的上部有黄白色泡沫层,质脆,易碎,断面光亮,气微,味微甜[2]。
鹿角胶作为我国传统中药材,历代古籍中均对其有详细记载,诸如《圣济总录》、《名医别录》、《本草纲目》、《玉楸药解》等两汉以来的诸多医药学典籍中,有270多个古方剂中曾使用过鹿角胶,并对其配伍规律、炮制方法、功能主治、临床应用等进行了详细的描述[3]。鹿角胶味甘、咸,性温,无毒,归肝、肾经[1]。主治伤中劳绝,补中益气,折跌伤损,疮疡肿毒,温肝补肾,滋益精血等。
随着近年来国内外对中药研究的逐渐深入,鹿角胶也成为了国内外学者研究的焦点。越来越多的功效被开发出来,例如:促进软骨及成骨细胞增殖,防治骨质疏松[4];提高机体免疫力,作为抗癌辅助治疗剂[3];保护胃黏膜[1];抗疲劳[3];抗炎镇痛[5],抗乳腺增生[6],补血活血[7],壮阳[8],抗老年痴呆[9]等。不仅是治病良药,更是补益佳品。
鹿角胶中主要含有动物蛋白质、氨基酸、多肽、激素等成分[9]。梅花鹿鹿角胶蛋白质含量高达91.52%。目前测得鹿角胶中氨基酸约有18种[10],总氨基酸含量为34.40%[3]。鹿角胶中还含有多种微量元素,包括:铜、锌、镍、铁、锰、氧化钠、氧化钾、氧化镁等[1]。张思巨[11]等采用红外、紫外、原子吸收光谱等方法寻找中药阿胶、鹿角胶和龟甲胶的内在特征时,发现鹿角胶中锌元素的含量是三种胶中最高的,可以大大补偿阳虚病,尤其是肾阳虚[9]。由此看来,现代化学的研究对鹿角胶的合理、有效应用具有很重要的指导意义。鹿角胶中还含有25%的胶质,50~60%的磷酸钙及少量雌酮、多糖、硫酸软骨素A,胆碱样物质等[12]。
中国药典规定,鹿角胶是鹿角经水煎煮、浓缩制成的固体胶,为单一来源的胶类中药,不允许添加其他胶类成分,然而,由于鹿角胶的生产原料鹿角来源有限,且价格昂贵,加之现行的中国药典标准尚不能有效地鉴定出鹿角胶是否添加了其他胶原成分,因此假冒伪劣现象时有发生。有的生产企业为降低成本,在鹿角胶加工过程中掺加价廉易得的牛皮,甚至掺加含有重金属铬的废旧皮革制得的明胶,致使鹿角胶的价格相差悬殊,质量参差不齐[13]。为了加强对鹿角胶的质量控制,建立一种行之有效的鹿角胶的鉴别方法,应用于相关药品的质量控制中,将极大推进我国药品质量监管的科学性与有效性,必将产生极大的社会效益。
在鉴别不同胶类药材的工作中,早些时候多集中于鉴定胶原蛋白的性质,比如:等电点、运动粘度,氨基酸成分及蛋白质含量[14]等;到后期逐渐发展了PAGE、IEF[15]、GFC、HPLC-MS及深入到分子领域的DNA鉴定技术。目前,蛋白酶解后与液质联用进行多肽识别,双向凝胶电泳及DNA鉴定技术为胶类药材研究的主流方法。胶原蛋白酶解后再采用液质联用进行多肽识别[16],需要进行大量的测试、对比、验证等工作,若是在这基础上建立起各胶类药材酶解的特征肽段及质谱信息库[17],对于实现动物胶类药材的专属性鉴别将有极大的意义,寻找可以切割出尽量多的特异性肽段的蛋白水解酶是这项工作的一个难点;双向电泳是一种比单独的SDS-PAGE或者IEF分辨率更高的电泳技术,是目前最好的蛋白质分离方法,根据电泳图谱可以直观的找出差异蛋白(多肽)点,但是该方法受样品中盐、脂质等的影响较严重,且谱图的重现性较差;DNA鉴定法可以准确的确定是否含有其他种源性成分,且重复性好,灵敏度高。
实验设计方案:
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