一、拟研究或解决的问题：
本课题建立和鉴定内皮特异性NMMHCⅡA敲除小鼠是否成功，可进一步验证前期实验结果，通过DNA，RNA及蛋白质的含量分析，筛选敲除成功且敲除效率合适的小鼠进行试验，为更精准的阐释NMMHCⅡA在脂多糖诱导的肺血管屏障损伤中的具体作用和分子机制奠定基础。
二、采用的研究手段：
（1）DNA提取
剪取小鼠尾约5~6 mm于2 mL的EP管中，剪碎后，加入180mu;L裂解液T和20mu;L蛋白激酶K，涡旋并55℃孵育5到6小时。加入20mu;L RNA酶，静置去2 min 除去RNA。用500mu;l准备液洗柱子，6500g离心1min。样品管加入200mu;l无水乙醇混匀。并将其转移至柱子中。6500g离心1min，弃下管。随后加入500mu;l洗涤液，7500g 离心5min，弃下管。加100mu;l洗脱液，7500g 离心5min，收集洗脱液。再加入100mu;l洗脱液，7500g 离心5min，收集洗脱液并与之前的混合，采用Nanodrop 2000/2000C 分光光度计测定RNA浓度，并于-20 ℃保存
（2）RNA提取
取50~100mg肺组织，加入Trizol 1 mL，匀浆器中匀至无肉眼可见组织，转移到1.5 mL的道夫管中，C4，7500 rpm，离心5 min，把上清转移至新的1.5 mL道夫管中，加入200 mu;L氯仿，用力振摇15 s，C4 放置5 min，C4 ，12000 rpm，离心15 min，，转移上层水相（约200~400 mu;L）到1.5 mL的道夫管中，加等体积的异丙醇，上下颠倒混匀，C4 放置10 min，C4，12000 rpm，离心10 min，弃上清液，加预冷的75%乙醇1 mL，轻轻洗涤，C4 ，7500 rpm，离心5 min，空气干燥5～10 min，加20 mu;L 1permil;DEPC水溶解RNA，总RNA 放于C-80 保存。
（3）免疫印迹
提取肺原代内皮细胞，待90 %细胞铺面培养皿时，取出，弃去培养基，每皿用冷PBS洗涤2次，吸干；加入70mu;L裂解液混合物（裂解液和PMSF=100:1），冰上用刮刀刮取细胞收集裂解液至预冷的1.5 mL道夫管中。4 C裂解30 min。12000 rpm，10 min，4 C离心。收集上清液即为蛋白溶液，蛋白定量，根据40mu;g上样量，用裂解液混合物调整上样体积至一致。免疫印迹检测NMMHCⅡA的
（4）免疫荧光切片
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