一、论文研究的主要目的及意义
巨噬细胞是遍布于全身机体的免疫细胞,它们通过吞噬作用直接的杀伤病原并且间接地分泌促炎细胞因子(如TNF-alpha;、IL-1beta;、IL-6)对损伤进行应答。内毒素(LPS)为脂多糖,能诱导巨噬细胞产生大量炎性介质如NO、前列腺素E2(PGE2)、TNF-alpha;、MMP-9。这些炎性介质在炎症发生发展中占有重要地位。RAW264.7是鼠源性的巨噬细胞,本实验采用LPS刺激RAW264.7的炎症模型进行大量天然产物的活性筛选,利用Elisa技术对不同细胞因子表达水平进行检测,利用Elisa的反应原理建立高通量筛选(HTS)体系,从而筛选出对特异细胞因子有抑制作用的活性药物,为抗炎免疫药物的应用和解决炎症性疾病临床治疗的难题提供研究基础。
二、文献综述
1、国内外研究的历史和现状
1.1、抗炎免疫抑制作用研究进展
一些年来,我国抗炎免疫药理学以分子生物学为基础在研究疾病的发病机制,在分子层次上认识药物的作用机制,进而寻找新的分子靶点,筛选选择性调节免疫功能的药物及以基因工程技术生产药物等方面取得了较大的进展,正在努力接近该领域的科学前沿,在某些方面开始形成一些我国的特色。
细胞因子作为免疫细胞间相互作用的介质在免疫应答中发挥重要作用。免疫细胞受抗原刺激活化后不仅能增殖、分化生成效应性细胞和分子,同时能表达新的膜蛋白分子和分泌一些细胞因子,这些活化后出现的免疫分子可通过多种方式作用于活化的免疫细胞或自身反应性免疫细胞介导其凋亡,或产生抑制性信号抑制免疫细胞的功能,以清除活化和自身反应性免疫细胞,进而维持内环境的稳定和平衡。综合查阅的大量文献资料以及现阶段国内外的研究进展发现,以细胞因子和细胞因子调节网络为靶点的免疫药理学研究对于抗炎免疫药理学方向仍然非常重要,但单独深入的研究并不多,事实上有着非常重要的研究价值。目前以细胞因子为靶点的研究分为两大方面即细胞因子基因治疗研究和抗炎免疫抑制作用研究,前者如将编码细胞因子的基因通过载体导入体内,使之持久表达治疗剂量的蛋白质用于各种自身免疫疾病的防治,后者如抗细胞因子单克隆抗体、细胞因子受体拮抗剂和可溶性细胞因子受体的研究等[12],这方面的研究前景仍较为广阔。
1.2、高通量药物筛选中国的发展趋势
高通量筛选技术,是目前药物筛选领域研究的重要课题,与传统的药物筛选方法相比有以下几个优点:反应体积小;自动化;灵敏快速检测;高度特异性[1]。但是,高通量筛选作为药物筛选的方法,并不是一种万能的手段。首先,高通量筛选所采用的主要是分子、细胞水平的体外实验模型,因此任何模型都不可能充分反映药物的全面药理作用;其次,用于高通量筛选的模型是有限的和不断发展的,要建立反映机体全部生理机能或药物对整个机体作用的理想模型,也是不现实的。但我们应该相信,任何技术的进步,都将为科学的发展起到促进作用。随着对高通量筛选研究的不断深入,随着对筛选模型的评价标准、新的药物作用靶点的发现以及筛选模型的新颖性和实用性的统一,高通量筛选技术必将在未来的药物研究中发挥越来越重要的作用。
2、采用的研究手段
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