课题背景：
抗体药物是以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程技术制备的药物， 具有特异性高、性质均一、可针对特定靶点定向制备等优点，在各种疾病治疗，特别是肿瘤治疗领域的应用前景备受关注。当前，抗体药物的研究与开发已成为生物技术药物领域研究的热点，居近年来所有医药生物技术产品之首。
与小分子药物不同，抗体属于具有高级结构的蛋白质，其中抗体的稳定性（Stability）是制约抗体药物发展的瓶颈之一。如何提高抗体的稳定性已成为治疗性抗体研发中的一个关注焦点。特别需要指出的是，近年来，随着治疗性抗体的不断开发，越来越多的研究者发现，抗体的稳定性是治疗性抗体及抗体片段开发中的关键问题。抗体的稳定性优劣会影响各种细胞类型的抗体表达水平，导致生产部分无功能或错误折叠的物质，或导致随时间所形成大的、具有潜在免疫原性的蛋白聚集体。因此，抗体的较差稳定性所会影响纯化工艺开发、工艺中存储和操作，以及配方设计和生产等各个方面。
蛋白质的稳定性及生物学效应不仅取决于一级序列，更主要的是取决于其空间构象。抗体作为一种特殊的蛋白质，其结构具有高度特异性、多样性。一般说来，蛋白不稳定分为两种：化学不稳定性和物理不稳定性。化学不稳定性涉及共价键的合成和断裂的过程，生成新的化学实体。相反，蛋白质的物理不稳定性其化学成分并没有改变，而是蛋白质物理状态的改变。这包括变性，聚集，沉淀，吸附等。
目前,为了提高药物的研发速度,抗体药物的稳定性研究主要通过加速降解实验及长期储存实验进行。加速降解实验主要通过将抗体药物用高强度的酸,碱,反复冻融等方法处理,研究在恶劣条件下药物的稳定性,长期储存实验是将抗体药物储存在不同温度下一个月至一年，研究存储过程中药物的稳定性。
本课题研究的内容即为抗体药物的长期储存稳定性，是天演药业（苏州）有限公司抗体药物稳定性研究实验中的一部分。
研究的主要内容：
本课题目的在于研究本实验室所研发的抗体IgG-001在长期存储过程中的物理稳定性。通过在4℃和37℃的28天的长期存放，利用DSF,SDS-page，SEC-HPLC等方法研究抗体存储过程中的变化。
实验流程：
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细胞培养上清的收集和抗体纯化
- 将细胞培养上清收集到50 ml 离心管（Thermo NUNC），10,000times;g离心20 min, 分离上清液。
- 过滤及浓缩。
- 使用10 ml注射器将处理好的上清通过上样阀注射到上样环（50 ml）中。
- 通过控制软件将上清“Insert”至Mabselect Sure亲和柱上，在上样过程中流速用0.5 ml/min。
- 上样结束后，使用Protein A binding buffer冲洗柱子（通常最少5-10倍柱体积），直到吸收值达到基线或者没有物质被洗脱出来。
- 将1.5 ml离心管加入约130 micro;l Neutralization Buffer。使用Protein A Elution buffer进行一步洗脱。洗脱时流速为:1 ml/min ，直到吸收值达到基线或者没有物质被洗脱出来，大约5倍体积。
- 浓缩蛋白及交换Buffer对抗体进行长期储存。
- 抗体的长期储存实验
提高温度可能是导致蛋白的球状结构丧失的最普通的胁迫条件。温度与蛋白展开情况的函数曲线是S形，其中点对应的温度值被作为Tm值（表示熔化温度）。在一般情况下，可以想到Tm值的增加反映了构象稳定性的增加。
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