开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题的研究背景、意义和目的
单克隆抗体是针对一种抗原决定簇的抗体，它经历了鼠源性、嵌合、人源化和全人源单抗四个阶段[1]。单抗具有的特点，一是特异性，针对特定的单一抗原表位，它具有高度的特异性，抗肿瘤抗体药物的研究表明，其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。二是多样性，主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样性等方面。三是定向性，抗体药物可以定向制造，就是根据需要制备具有不同治疗作用的抗体药物。
在全球单抗市场中，人源单抗是其未来的发展方向，人源化抗体又称互补决定区移植抗体，是指抗体的可变区部分（即Vh和VI区）或抗体所有全部由人类抗体基因所编码。已在欧美上市的32个单抗中，有9个是全人源单抗，随着转基因小鼠和噬菌体展示技术的成功应用，全人源化克隆单抗的比重将逐步增大。全人源化抗体是指将人体抗体基因通过转基因或转染色体技术，将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达人类抗体，达到抗体全人源化的目的。已建立多种方法生产完全人源性抗体，主要有噬菌体展示技术、转基因小鼠技术、核糖体展示技术和RNA-多肽技术。
单克隆抗体是现代生命科学研究的重要工具，为许多领域的发展作出了不可估量的贡献。随着PCR技术和单克隆抗体技术的发展和成熟，单个B细胞抗体制备技术迅速兴起。该技术能够对单个的抗原特异性B细胞进行抗体基因的体外克隆和表达，保证了轻重链可变区的天然配对，相较于传统的抗体制备技术具有效率高、全人源、基因多样性更丰富等优势。同时也促进了包括抗体发生成熟、疫苗保护机制、疫苗开发、肿瘤及自身免疫疾病等免疫学相关研究[2]。
单B细胞抗体技术是制备全人源单抗的有效方法，但是由于存在自身免疫耐受无法获得针对自身抗原的特异性B细胞。研究表明免疫原性氨基酸可有效研究表明，在天然蛋白质分子中引入免疫原性氨基酸可以有效突破自身免疫耐受，为解决B细胞来源问题提供了思路。为了获得针对自身抗原的特异性B细胞，首先需要建立体外刺激淋巴细胞分化的方法。但是由于个体差异较大，目前尚无通用的体外刺激方法，因此本研究拟通过改变细胞因子、淋巴细胞种类、免疫佐剂、细胞密度等实验条件，初步研究抗原的体外免疫作用，建立体外刺激人外周血淋巴细胞分化的通用方法，为获得全人源抗体提供前期基础。
二、课题研究的主要内容
1.人外周血单个核细胞(PBMC)的制备
通过密度梯度离心从健康人提供外周血分离出人PBMC。用亮氨酸甲酯处理（LLME），除去NK细胞和单核细胞等免疫抑制细胞。
2.体外免疫
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