诺西肽nosP基因功能的研究文献综述

 2022-12-03 06:12

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一.拟研究或解决的问题

通过生物信息学对诺西肽的基因簇进行分析,推测nosP编码诺西肽合成途径中具有特异性的调节功能蛋白。为了对nosP具体功能展开研究,我们以野生型Streptomyces actuosus ATCC 25421(WT)为蓝本,成功构建了nosP缺失突变株(△nosP)、nosP过表达菌株(WT P)和nosP回补突变株(△nosP P)三种突变菌株,本课题通过进行RT-qPCR来研究nosP在转录水平上对诺西肽生物合成的影响。

  1. 拟采用的研究手段

1. 总RNA的提取。通过TaKara的RNAiso Plus对链霉菌的总RNA进行提取。

2. DNA和基因组DNA的去除。用DNase I,RNase Inhibitor,gDNA eraser等试剂通过一系列操作除去DNA及基因组DNA。

3. cDNA的获得。 以RNA为模板,在逆转录酶的催化下,随机引物、oligo(dT)或基因特异性引物的引导下合成互补的DNA。

4. RT-PCR。 以cDNA为模板,通过聚合酶链式扩增反应扩增合成的目的片段。

三.文献综述

诺西肽(Nosiheptide,又称多硫霉素)是一类含有多个噻唑环并富含硫元素的肽类抗生素,由Streptomyces actuosus (ATCC 25421)产生,是一种新型的非吸收性动物饲料添加剂,适合于抑制肠道内革兰氏阳性细菌的生长[1]。诺西肽(结构如图1所示)纯品为黄色针状晶体,熔点310~320℃。诺西肽的分子式为C51H43N13012S6,分子量为1222.37,易溶于二甲基亚矾(DMSO)、二甲基甲酞胺(DMF),吡啶、氯仿:甲醇(80:20)、二氧六环;微溶于乙醇、甲醇、乙酸乙酷、丙酮、氯仿;不溶于水、石油醚、冰醋酸,属于脂溶性抗生素。

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