开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、实验目的
紧密连接蛋白(occludin)是细胞间紧密连接上的主要蛋白质之一, 其功能状态与多种疾病的发生、发展密切相关。
针对occludin蛋白基因(OCLN)找出针对性的有效sgRNA以用于基因的激活,增加OCLN基因的表达。熟悉并掌握CRISPR/dCas9系统激活基因的流程,为后续进行的功能基因筛选的工作和药物调控机制的研究做准备。
二、研究内容和研究手段
1、确定靶基因:
利用UCSC/NCBI查询OCLN基因序列,找到TSS,选取TSS的-200bp ~ 50bp区域;
2、设计sgRNA:
利用http://crispr.mit.edu/设计sgRNA,选择合适的质粒载体,根据载体对应的内切位点设计引物,合成[sgRNA序列(正向 反向) 引物]片段;
3、克隆sgRNA:
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