开题报告内容:
1.课题研究的目的和意义
中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO)是生物工程上广泛使用的哺乳动物细胞表达系统。与微生物表达系统相比,哺乳动物细胞表达系统能够更好地完成对目的蛋白的翻译后修饰(如糖基化)而倍受青睐,另外该细胞属于成纤维细胞,是一种非分泌型细胞,本身很少分泌CHO内源蛋白,因此对目标蛋白分离纯化工作十分有利。在细胞培养上,CHO细胞因为无细胞壁,机械强度低,适应环境能力差,培养环境改变时(如渗透压升高,pH改变)容易发生凋亡。
早前,科学家在家蚕中发现并分离出有抗昆虫和人源细胞凋亡功能的一组结构相关、分子量约为30kDa的蛋白,称为30K蛋白家族,共有五种同源蛋白(30Kc6、 30Kcl2、 30Kcl9、 30Kc21和30Kc23),实验证实,其中的30Kc6蛋白具有显著的抗凋亡活性,进一步研究发现其对目的蛋白的表达也有促进作用。这一成果应用于重组细胞株的工程化改造,对提升工程细胞性能有重要意义。
本实验就是研究将上述30Kc6基因转入CHO-K1细胞,并筛选可稳定表达该基因的细胞系的流程及方法,旨在为通过转基因技术实现CHO细胞株优化改造提供实践依据。
2.拟研究和解决的问题
1.目的基因载体的选择和获得方法
2.研究将目的基因导入CHO细胞的手段方法
3.转染效率及表达效率的鉴定
4.稳定高表达目的基因的细胞系的筛选
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