开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一．选题依据
血管形成是指毛细血管从已构建的血管网中以出芽方式新生的过程，它方便肿瘤组织的营养运输及代谢物的排除。无论其种类和来源如何，缺乏出芽毛细血管的血液供应，实体瘤均不能生长。因此抑制血管形成也就成为开发控制肿瘤药物的重要靶点。由于VEGF/ VEGFR2在新生血管生成中的重要性,使靶向VEGFR2的治疗成为了治疗各种相关疾病的重要策略。可以考虑从VEGF/ VEGFR2信号途径的各个环节采用不同的措施进行干扰。如，应用VEGF 的异二聚体干扰受体的二聚化；采用可溶性的受体竞争抑制VEGF 同天然受体的结合；或者用小分子蛋白激酶抑制剂阻断VEGFR2的信号转导等。这些干扰措施已经在抗肿瘤新生血管生成治疗中取得了较好的效果。随着对VEGFR2结构和信号转导机制研究的深入，相关病理生理现象机制将会得到更进一步的阐明,这也将更利于知道相关疾病的治疗.
大量研究证明，VEGFR在正常人体组织中呈低水平表达，而在绝大多数肿瘤中呈现高表达，且VEGF受体不仅表达于血管内皮细胞，还表达与肿瘤细胞，故认为除旁分泌外，还存在自分泌途径。它不仅促进血管内皮细胞分裂，增殖，且诱导肿瘤血管增生，并促使其肿瘤细胞生长转移。在肿瘤组织内VEGFR的表达明显高于正常内皮细胞，血管的发生对于肿瘤的生长和转移起着关键的作用。因此，以VEGFR做为靶点，可为治疗和诊断肿瘤提供新的理论依据。国内众多作者报道，VEGF受体在肿瘤组织中的表达上调，并伴随肿瘤分级的上升而表达增强。同时在肿瘤组织中VEGF的表达称正相关。证明VEGF和一些其他生长因子相似，可以在不同状态下调节本身的受体表达，以达到促进肿瘤细胞增生，临床恶性程度上升及转移的功能。
血管新生时许多生理和病理进程发生的重要机理，在生物体内，血管新生需经过多步精细调控历程；现有研究表明，血管内皮生长因子及其受体蛋白酪氨酸激酶，尤其是血管内皮生长因子受体-2所介导的信号级联通路是其中关键性的调节途径，VEGF/ VEGFR2所介导的信号级联通路可以调控血管内皮细胞的增殖，迁移，存活和通透性的改变，促进血管的新生。因为肿瘤的生长需要通过血管来提供氧气和养分，若没有肿瘤血管和新生血管的支持，肿瘤的生长不会超过2mm。因此，这个实验通过研究VEGFR2胞外(I~IV)区在大肠杆菌中的可溶性表达，了解VEGFR2的功能，并通过抑制VEGFR2与VEGF的结合筛选出对VEGFR2有一定抑制作用的活性化合物，为针对VEGF/ VEGFR2的抗肿瘤化合物筛选提供参考。
随着天然产物大规模分离制备技术与高通量筛选技术的迅猛发展,天然产物及合成的活性化合物已成为抗肿瘤药物筛选的重要来源之一。常见的抗癌药物体外筛选方法主要有：MTT 比色法、SRB法、CCK-8法、酸性磷酸酶法、ATP生物发光法等。常规实验中常用的MTT法与常用的SRB法；MTT比色法因其具有简单、快速、精确、不涉及使用放射性元素，且结果与同位素掺入法一致等优点,在很多实验室被广泛使用作为抗癌药物体外筛选的常用方法。但是MTT比色法实验环节要求严格, 操作不当结果重复性差，且工作量大，操作繁琐，不适用于大规模的活性化合物筛选。SRB法其敏感好、准确度高、适用于大规模药物筛选等优点,其中SRB法染色步骤多, 操作繁琐，易造成人为误差。ELISA方法是一种经典的测定蛋白质之间相互作用的方法，具有简便、灵敏、稳定等特点,在生物医药领域得到了广泛应用。用活性化合物与受体蛋白的结合或相互作用可以有效地阻滞受体与配体的作用，建立合理、高效、简便的抗肿瘤药物筛选新方法用于活性化合物的筛选。
二．课题研究的问题
本课题旨在原已含有目标基因VEGFR2(I~IV)的基因工程载体pET-28a上对目的基因进行扩增和修改，将在VEGFR2(I~IV)的前后增加适当长度的软性Linker (GlySer4)链以及额外一个His-Tag标签，以解决原载体所表达的目标蛋白挂柱效果不好，分离状况不佳的问题。并且，使用所产生的VEGFR2(I~IV)蛋白建立起VEGFR2受体抑制剂ELISA筛选系统。
三.课题研究的方法
1. 从BL-21中抽提质粒pET-28a，以pET-28a-VEGFR2为模板，扩增VEGFR2 (I~IV)基因。
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
