抗生素在临床应用范围广泛,并不断发展,层出不穷,为人类疾病的预防和治疗作出了杰出贡献[1]。但是,随着抗生素的应用越来越广泛,滥用抗生素问题也日趋严重。尽管抗生素的不断研发大大地降低了传染性疾病的发病率和病死率,但细菌耐药性的出现和蔓延却严重地威胁和破坏着人类抗感染治疗地效果,随着经济贸易的全球化,耐药菌株也在国际间传播,导致细菌对抗生素耐药现象的全球化[2]。因此,发现新型有效的抗生素迫在眉睫。
放线菌是一类原核生物,与人类的关系十分密切。至今已报道通过的近10000种抗生素中,约70%由放线菌产生 [3]。经过多年研究,从普通环境中发现新型微生物活性成分越来越困难,人们开始将研究的目光投向特殊环境微生物,尤其是极端微生物,以期得到新的微生物种类和新的抗生素或其他生物活性物质[4]。
放线菌是抗生素生产的主力军,适宜于干燥、偏碱性的环境[5],而海岸潮间带高温、强风、高盐和潮汐频繁、尤其是土壤缺氧及强酸性的生态环境,造就了红树林植物独特的形态结构和生理生态特性及红树林生态系统中独特而又丰富的微生物资源。从红树林放线菌次级代谢产物中分离新化合物已经成为海洋药物研究的热点,虽然有关红树林植物内生放线菌次级代谢产物的研究还较少,但也已取得了部分成绩。2010年Wang等[6]从中国福建厦门的红树植物桐花树叶片中分离出链霉菌HK10552,并从其发酵产物中分离纯化得到4个新的共轭多烯大环内酯类化合物。2011年闫蕾蕾等[7]从红树植物木榄叶片中分离出链霉菌I07A-01824,并从其发酵产物获得了抗真菌活性的新抗生素:抗霉素A18。2011年Chu等[8]从中国福建九龙江口红树植物秋茄茎部分离出内生链霉菌A1626,从中分离出化合物CA1189,对白色念珠菌、新型隐球菌和烟曲霉菌具有中度抗菌活性。2013年Crevelin等[9]从巴西红树植物美国大红树内生链霉菌中分离得到3个已知物bafilomycin B1、B2和bafilomycinC1-amide。2014年Wang P 等[10]从红树植物木果楝中分离出新种Jishengella endophytica,并从其发酵液中得到13个化合物。
红树林植物生长于海岸潮间带,其独特的生存环境赋予它丰富的微生物资源,尤其是内生菌资源,而丰富的物种多样性预示其具有在合适培养条件下产生高化学多样性活性物质的巨大潜力,已成为开发微生物药物的热点药用资源。鉴于近年来研究学者对稀有放线菌和放线菌新物种来源的新抗生素的极大关注,故本研究展开红树林植物内生放线菌的多相分类鉴定,以期为后期化合物的研究奠定菌株基础。
实验流程:
在相同实验条件下,通过比较菌株与参比菌株在形态培养特征、生理生化特征、细胞化学组分和分子分类上的异同,确定其分类地位。
2.1菌株的形态特征和培养特征
通过菌株形态特征(细胞形态、大小、基内菌丝和气生菌丝的多寡、基内菌丝生长和断裂方式、孢子的着生部位、孢子数的多少、孢子表面结构、孢囊形状、鞭毛的有无等)和培养特征(在各种培养基上的生长征状,一般以菌落的形状、表面状况、质地、光泽、气生菌丝、基内菌丝和气生菌丝的颜色、可溶性色素的有无和不同培养基上的生长状况作为主要特征)观察、革兰氏染色、光学显微观察菌丝和孢子的基本形态结构、投射电镜观察孢子鞭毛和细胞的超显微结构来比较其与参比菌株的异同。
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