一、课题的研究背景、意义和目的
甲胎蛋白是一种糖蛋白，正常情况下，这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生后约两周甲胎蛋白从血液中消失，因此正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20mu;g/L。但当肝细胞发生癌变时，却又恢复了产生这种蛋白质的功能，而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加，甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标。在临床检测中，甲胎蛋白含量的高低并不能反映肿瘤的严重程度或者病变程度，而是作为一种肿瘤信号。甲胎蛋白为肿瘤相关抗原，是原发性肝癌诊断和生物治疗重要的靶抗原，具有免疫抑制和促进肿瘤细胞生长的作用。
单链抗体由抗体VH和VL片段通过一段柔性肽连接而构成。由于ScFv抗体分子量只有全抗体的1/6，只有抗体可变区片段，不含恒定区，免疫原性较低，也易于穿过血管壁和组织屏障，没有Fc段，减少了与组织的非特异性结合，同时具有亲本抗体相同的特异性和亲和性，结构简单，容易进入肿瘤内部。基于AFP具有免疫抑制和促进肿瘤细胞生长的作用。抗AFP的scFv进入体内可与游离的AFP结合，加速AFP的清除并阻断AFP对肝癌细胞的生长促进作用。
本实验室前期构建、表达、筛选并纯化得到了活性较好的AFP单链抗体。本课题拟针对AFP单链抗体对肝癌细胞增殖的抑制作用进行研究，对抗AFP单链抗体进行纯化,随后通过对肝癌细胞进行给药培养，通过MTT、流式细胞术检测来确定抗AFP单链抗体对肝癌细胞增殖及凋亡的影响，为治疗肝癌的药物研究提供理论依据。
二、课题研究的主要内容
1. AFP单链抗体的表达及纯化
1.1 大肠杆菌表达AFP单链抗体；
1.2 AFP单链抗体的纯化；
利用镍亲和层析柱对变性后的AFP单链抗体的纯化，随后进行稀释复性、超滤浓缩得到目的蛋白
1.3 ELISA鉴定AFP单链抗体的活性。
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