LC-MS/MS法检测人血浆中坎地沙坦及氨氯地平的方法学验证文献综述

 2022-12-17 07:12

一.研究背景

坎地沙坦酯用于治疗原发性高血压，坎地沙坦自身口服吸收较差，临床上多应用其前药坎地沙坦酯，它对于轻中度高血压是一种安全有效温和的降压药，不良反应与安慰剂相当，对靶器官的保护来降压的一种机制，作用与冠心病病理生理的各个环节，降低心力衰竭患者住院率，提高生活品质，是一个具有广泛应用前景的药物。坎地沙坦酯在体内迅速被水解成活性代谢物坎地沙坦，坎地沙坦为选择性血管紧张素Ⅱ受体(AT1)拮抗剂，通过与血管平滑肌AT1受体结合而拮抗血管紧张素Ⅱ的血管收缩作用，从而降低末梢血管阻力,国外对该药研究较为深入全面，但国内该药的药动学及生物等效性方面报道较少[1]。氨氯地平是第三代二氢吡啶类钙离子拮抗剂，临床上主要用于高血压和心绞痛的治疗，与同类其他降压药相比，具有口服吸收好消除半衰期长，不良反应轻微的优点[2]。为了使坎地沙坦和氨氯地平在人血浆中浓度测定的分析方法具有科学性，适用于相应的检测要求，本课题拟对利用LC-MS/MS对人血浆中坎地沙坦和氨氯地平浓度测定的方法进行方法学验证

二.研究内容

1.实验目的

本实验的目的是验证使用液质联用（LC-MS/MS）测定人血浆中坎地沙坦（Candesartan）和氨氯地平（Amlodipine）浓度的分析方法。为测定人血浆中坎地沙坦（Candesartan）的浓度提供科学、合理的分析方法，从而为其药代动力学研究奠定基础。

2.实验材料

2.1仪器和材料

    • API 5500 质谱仪（Analyst 软件 1.6.3，AB公司）
    • 岛津 LC30AD高效液相色谱系统
    • Waters ACQUITY UPLCreg; BEH C18 1.7 mu;m (30 x 2.1 mm)色谱柱（含预柱 ACQUITY UPLC CSHTM C18 1.7mu;m）
    • RACKCHANGERⅡ自动进样器
    • Watson LIMS系统 7.4 SP1 版（Thermo Fisher Scientific Inc.）
    • 赛多利斯MCM36电子天平
    • 梅特勒-托利多XS205DU电子天平
    • 赛默超低温冰箱88700V
    • 赛默ES系列冷冻冰箱
    • Haier医用冷藏箱HYC-940
    • IKA 涡旋仪
    • Eppendorf 5920R 离心机
    • 赛默飞世尔1300系列Ⅱ级A2型生物安全柜
    • 移液器，Eppendorf
    • 昆山KH-300B超声波清洗器

注释：同等材料可以替换。

2.2化学品和试剂

    • Candesartan（批号： 1-LWJ-97-1， 纯度： 97%；厂家：TRC；过期日期： 06/13/2019； 校正因子：1.03）
    • Amlodipine Besylate（批号： 5-SCC-113-1， 纯度： 98%；厂家：TRC；过期日期： 06/22/2019； 校正因子：1.42）
    • Amlodipine-d4（批号： 12-DPP-27-2；纯度： 97.3%；厂家： TRC；过期日期：10/19/2019；校正因子：1.03）
    • Candesartan-d5（批号： 2-YMK-62-1；纯度： 97.7%；厂家： TRC；过期日期：04/08/2019；校正因子：1.02）
    • 去离子水（密理博纯化系统自制）
    • 甲酸，色谱纯，Sigma
    • 甲醇，色谱纯，Fisher Scientific
    • 乙腈，色谱纯， Fisher Chemical
    • 二甲基亚砜（DMSO），Solarbio
    • 甘油三酯 混合物，Sigma
    • 空白人血浆含 EDTA-K3，BioreclamationIVT
    • 空白人全血含EDTA-K2，公司内部提供

3.实验设计

方法验证包括：选择性，基质效应，回收率，灵敏度，样品残留，线性，准确度，精密度和稳定性的评估。

3.1储备液检查

Candesartan：精密称量两份约重1 mg的Candesartan于1.5 mL离心管中，并用校正因子校正后，分别加适量的DMSO溶解配制成浓度为1.00 mg/mL的溶液，即得储备液1和储备液2。分别取上述储备液1和储备液2适量，各自用稀释液稀释，平行制备6份为浓度均100 ng/mL的工作液，分别代表相应的储备液1和储备液2，再进样10.0 mu;L到LC-MS/MS系统，通过比较各自的峰面积来确定储备液1和储备液2的[3]；

Amlodipine：精密称量两份约重1 mg的Amlodipine于1.5 mL离心管中，并用校正因子校正后，分别加适量的DMSO溶解配制成浓度为1.00 mg/mL的溶液，即得储备液1和储备液2。分别取上述储备液1和储备液2适量，各自用稀释液稀释，平行制备6份为浓度均100 ng/mL的工作液，分别代表相应的储备液1和储备液2，再进样10.0 mu;L到LC-MS/MS系统，通过比较各自的峰面积来确定储备液1和储备液2的。

差异（%）=（平均峰面积1 - 平均峰面积2）*100/总的平均值

储备液1或2的峰面积平均值为至少进样3次的平均值；

总的平均值=（平均峰面积1 平均峰面积2）/2

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