开题报告内容：
1.研究概述
RNA干扰（RNA interference，RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的同源mRNA高效特异性降解的现象。RNAi技术已被应用于基础研究，如阐明基因功能、建立模型系统和识别新的分子靶标等。目前，RNAi正逐步从基础研究向有效的疾病治疗策略发展，与传统基因治疗方法相比，RNAi具有高效、低毒、特异性强的优势。作为RNAi的介体，小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）是一种合成的含有21至23个碱基对的dsRNA分子。进入细胞质后，siRNA参与形成RNAi沉默复合（RNA induced silencing complex，RISC），RISC序列特异性裂解靶mRNA，在mRNA水平抑制靶蛋白的表达。[2] siRNA已成为许多疾病潜在的治疗手段。目前，眼睛被认为是RNAi治疗的良好靶标，主要是因为它是密闭的隔室，可及性较高。siRNA作为负电性生物大分子，在生物体内易受到酶解及荷负电细胞表面排斥等影响，难以进入靶细胞发挥基因沉默功效，需借助安全、有效、稳定的递送载体，保护siRNA在体内递送过程中的稳定性，并将其递送至细胞内发挥功效。[8]局部滴注是最方便、副作用最低、患者依从性最高的递送方式，但是存在药物生物利用度低的缺点，可以采取不同的策略来改善活性成分的角膜前停留时间和/或渗透能力。
目前壳聚糖（Chitosan，CS）及其衍生物已广泛应用于siRNA的递送，CS是天然阳离子聚合物，无免疫原性、生物可降解、安全性好，分子结构上的活性氨基可连接不同功能基团。透明质酸（Hyaluronicacid，HA）是一种天然的带负电的大分子链状粘多糖，具有生物黏附特性，可以通过粘膜粘附作为延长角膜前区域眼剂形式的持久性的机制。[1]本实验以siRNA为模型药物，利用CS的游离氨基与TPP的阴离子发生离子交联反应而制得纳米粒，CS表面有大量的活性氨基，可在催化剂的作用下与HA表面的羧基发生共价偶联反应，将siRNA分子压缩并包裹，制得HA修饰的壳聚糖纳米粒以递送siRNA， 保护siRNA的同时增加其在角膜前滞留时间，提高siRNA局部滴眼液的生物利用度。
2．研究内容
纳米粒的制备、纳米粒体外稳定性试验
3.研究手段
3.1空白壳聚糖纳米粒的制备
分别精密称取25.0mgCS于10mL容量瓶中，1%HAc定容至刻度，配制成浓度为2.50mg/mL壳聚糖醋酸溶液;20.0mgTPP于10mL容量瓶中，双蒸水定容至刻度，配成2.00mg/mLTPP溶液。将两溶液分别过0.45um和0.22micro;m的微孔滤膜，备用。取上述壳聚糖溶液定量，磁力搅拌下缓慢滴入TPP溶液，观察反应体系变化，至出现乳白色胶体溶液，将其离心（12000rmin1x40min），弃上清液，所得沉淀冷冻干燥即得空白壳聚糖纳米粒。[3]
3.1.1制备方法—离子凝胶法
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