开题报告内容：
1.研究背景
近年来，糖尿病已成为继肿瘤、心血管病之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病。糖尿病分1型糖尿病(Type 1 diabetes,T1D)、2型糖尿病(Type 2 diabetes)和妊娠期糖尿病(Gestational diabetes)。目前临床上的患者一般需终生注射外源性胰岛素来稳定血糖，作为一线治疗药物，该法常伴随增重，低血糖，过敏，皮下脂肪营养不良，诱发肿瘤等副作用，因此单一的胰岛素注射方法已越来越不能满足临床的需求，一些新型治疗药物相继被开发。常见的有免疫系统调节剂，如抗CD3和抗CD20单克隆抗体；抗炎症因子类药物如抗TNF-alpha;；免疫耐受诱导物GAD65、胰岛素；以及beta;细胞保护药物如抗胰蛋白酶（AAT）等等。[1-3]
实验室前期的研究发现，DNase I（Deoxyribonuclease I）可以减少糖尿病模型鼠NOD小鼠T1D的发生率，本课题目的是利用乳酸菌表达载体pCYT，通过构建得到pCYT：DNaseI质粒，转化入乳酸菌中，获得的重组乳酸菌可用于后续研究。[4]
随着基因工程与分子生物学技术的发展,乳酸乳球菌(Lactococcus lactis，L.lactis)作为重组载体菌株的研究已卓见成效,人们利用DNA重组技术,使其携带外源基因并表达外源基因产物,
从而发挥更大的应用价值。[5]
乳酸菌在食品工业中应用广泛，是被公认为安全的（generally recognized as safe，GRAS）食品级微生物。乳酸菌是肠道益生菌，有多种生理功能，如控制肠内感染、抗肿瘤活性等，还能促进小肠局部细胞免疫和体液免疫。乳酸乳球菌通过改造可以成为食品级基因表达系统。食品级基因表达系统的基本要求如下：1) 载体必须是食品级的，由来自同源宿主或密切相关的安全级微生物的DNA组成，且不含有非食品级功能性DNA片段；2) 宿主菌为食品级且可鉴定及稳定的微生物，在食品中或进入人的消化道后必须是非常稳定的；3) 采用食品级选择标记，不能是抗生素抗性基因，给环境带来潜在安全隐患；4) 采用食品级诱导物，能够及时降解，对环境和粘膜的益生菌群没有威胁。乳酸乳球菌是GRAS食品级微生物，被用在食品发酵工业已经有悠久的历史，不仅对人体健康无害，而且许多研究表明，乳酸菌还具有提高机体免疫力，改善肠道微环境等许多优点。[6]
乳酸菌的转化需要一套稳定的转化方法。目前乳酸菌的主要转化方法有原生质体转化法和电转化。前者操作复杂,转化率较低,不利于广泛应用,特别是有工业应用价值的菌株,而后者操作相对简便,转化率相对较高,因而当今主要采用电转化法。但在目前的实验条件下,电转化法并未完善,主要存在转化效率低、重复性差等缺点。[7]
2.拟研究的问题
1）pCYT-DNase I 质粒的正确构建
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