肿瘤免疫治疗，是指应用免疫学原理和方法，提高肿瘤细胞的免疫原性和对效应细胞杀伤的敏感性，激发和增强机体抗肿瘤免疫应答，并应用免疫细胞和效应分子输注宿主体内，协同机体免疫系统杀伤肿瘤、抑制肿瘤生长。而免疫检查点是肿瘤免疫治疗的重要的内容，j是众多科学家攻克肿瘤治疗难题的一个新方向。所谓免疫检查点，是指免疫系统受共刺激信号分子和抑制性分子即免疫检查点的双重调节。在正常情况下，免疫检查点可以通过调节自身的免疫强度来维持免疫耐受，防止自身免疫性疾病的产生。然而机体在受到肿瘤的侵蚀时，其中的负性免疫检查点，如细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA4）、程序性死亡蛋白1（PD-1）、T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域（VISTA），其激活会抑制T细胞的杀伤肿瘤的能力，导致肿瘤细胞快速生长和逃逸，而阻断这些抑制信号即可提高抗癌免疫，最终达到消除肿瘤的目的。
CTLA4是典型的可下调T细胞活性的负向检查点，由于在治疗晚期黑色素瘤上的优异表现，其抑制剂Ipilimumab（商品名Yervoy）获得FDA上市批准，成为首个获批的免疫检查点抑制剂。免疫检查点PD-1，其配体PD-L1蛋白在多种肿瘤中高表达，促进T细胞到的凋亡，以帮助大量表达PD-L1蛋白的肿瘤生长。针对PD-1，目前开发出了PD-1抗体Nivolumab也有不错的疗效。二者联合用药治疗晚期黑素瘤患者时能够产生很高的应答率，且多数毒性反应在给予免疫调节药物后可以缓解。
作为一个免疫调节的新靶点，靶标分子VISTA在免疫调节领域有重要的调控作用。VISTA具有跟已知的传递共刺激信号的分子具有相似的免疫球蛋白可变区（IgV）其胞外IgV区与PD-1相似，因此VISTA又称为PD-1同源物。VISTA蛋白是典型的1型跨膜蛋白，胞外IgV区与ＣＤ28/B7家族分子序列相似。人的VISTA的表达与血供有关，在胎盘、脾、肺和白细胞中表达量高。细胞水平上，则在腹腔巨噬细胞、脾CD11b 单核细胞、CD11c 树突状细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞上表达较高。正常生理情况下，VISTA分子的免疫系统调节作用表现在VISTA在初始T细胞中就有很高的表达，可能在T细胞分化的早期就抑制了T细胞的激活。VISTA能够抑制T细胞分化成为调节性T细胞，降低白介素2的产生，但对B细胞的增殖不会产生影响。而且VISTA即使在脱离细胞培养环境下依然能使T细胞长期处于抑制的状态。因此VISTA有可能通过降低T细胞刺激信号来防止T细胞的过度激活。而在病理情况下，VISTA在肿瘤微环境和肿瘤浸润淋巴结中表达升高，可抑制T细胞对肿瘤细胞的免疫应答，VISTA与转移性黑色素瘤、诱导性黑素瘤和年龄相关的炎症表型的发生有关，且具有与PD-1不同的信号通路。基于这些特点，说明VISTA靶点的封闭可阻碍肿瘤细胞的生长，抑制自然调节性T细胞和肿瘤特异性诱导性T细胞的分化。当VISTAmAb与肿瘤疫苗联用时，治疗效果更加明显。
然而，我们不应只把目光放在其抗癌的美好前景上，其免疫抑制的功能在治疗自身免疫性疾病上以及器官排斥反应的治疗上也能给我们带来一些启示。一部分自身免疫性疾病是由于机体的免疫系统的免疫调节异常，导致机体开始对自身抗原产生免疫反应并导致自身卒子损害所引起的疾病；器官排斥反应是由于机体将外来的组织或器官等移植物作为一种“异己成分”，被受试者免疫系统识别，后者针对移植物展开攻击和破坏，是影响移植物存活的主要因素之一。VISTA具有与PD-1相似的结构和免疫抑制功能，鉴于PD-1/PD-L1信号通路能显著降低急性和慢性抑制免疫排斥反应，在Flies等的实验中发现，在小鼠急性移植物免疫排斥模型中，发现利用能特异性结合VISTA的mAbMH5A治疗小鼠，不仅可以明显降低小鼠肝脏和脾脏内供者小鼠CD4 T细胞和CD8 T细胞的扩增，还会显著降低脾、肝、小肠、肺、肾脏中T细胞的浸润。他们认为供者T细胞上的PD-1H的表达是调节免疫排斥的重要因素之一。因此猜想VISTA相关的激动剂可能会对自身免疫性疾病以及器官排斥反应的治疗起到一定的疗效。
本课题着手于VISTA激动剂的体外筛选，重点是建立起VISTA激动剂的体外筛选方法并进行验证。有许多问题需要解决：我们应该选用哪种细胞进行培养实验？选择怎样的检测指标？如何设计整个实验流程？等等。首先应理清实验思路：面对众多待筛选的化合物，先筛选出能够与VISTA有结合能力的化合物，同时观察结合能力的差异性。首先考虑选用ELISA来进行初筛，效率较高。初筛结束后，选择结合能力较强的化合物准备进行细胞实验。预计三月份可完成；四月份开始细胞培养条件的摸索以及正式开始细胞实验；待细胞实验结束后，再用ELISA检测细胞实验的结果。我认为整个实验有难度的地方在于细胞的培养和相关的实验操作的问题。对于这个问题，目前我已学习并成功进行了ELISA的操作，我会在三月份正式做初筛的同时进行细胞实验相操作的培训。
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