开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 题目：HPLC -MS/MS检测Beagle犬血浆中SHX34浓度的生物分析方法验证
- 选题意义：
1、HPLC -MS/MS由于对样品纯度的要求较低，可以适当简化样品前处理的程序，节省时间，且其具有更好的专属性、选择性和灵敏度，在生物样品的分析中有着广泛的应用。
2、准确测定生物基质中的药物浓度，对于药物和制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。
3、课题包含了在GLP条件下一个HPLC -MS/MS含量测定方法从开发至验证的整个过程，具有很强的综合性和实用性。
- 文献综述：
自1983年McLafferty等开发串联质谱技术(MS/MS)以来，经过短短十几年的发展，串联质谱已成为一种成熟的技术，在许多领域特别是在药学领域发挥了巨大作用。液相质谱联用实际上是以LC作为分离手段，MS作为检测手段的色谱技术，集LC的高分离能力和MS 的高灵敏度、高专属性为一体。在体内代谢物研究过程中，因待测物浓度太低，提取器纯品进行分析是比较困难的。应用液相质谱联用技术可获得复杂混合物中单一成分的质谱图，大大有利于药物杂质、药物代谢物和内源性化合物的分离与鉴定。药物降解产生的杂质或药物代谢转化后产生的代谢物，一般仅在母体药物的结构基础上进行部分结构修饰或变化，因此药物降解物和药物代谢物与母体药物常有相似的质谱特征离子，据此可对药物降解物和代谢物进行识别，并结合其他碎片特征，对其结构做出合理推断。串联质谱是时间上或空间上两级以上质量分析的结合，测定第一级质量分析器中的前体离子（precursor ion）与第二级质量分析器中的产物离子（product ion）之间的质量关系。
LC -MS/MS技术具有比MS/MS和LC -MS更优越的性能。首先通过LC的分离，使MS/MS可以分析具有大量杂质的混合物中的待测物，并提高分析的专属性、选择性和灵敏度，而且LC可以分离同分异构体，弥补了MS/MS的不足。另外，LC -MS/MS相对于LC -MS可以提供待测物更多的结构信息。质谱工作模式有产物离子扫描、前体离子扫描、中性丢失扫描、选择反应检测、多反应监测。可用于定性分析和定量分析。当用于定量分析时，采用选择离子检测（selected-ion monitoring, SIM）或选择反应检测或多反应检测，外标法或内标法定量。内标化合物可以是待测化合物的结构类似物或其稳定同位素（如2H，13C，15N）标记物。复杂样本中的有毒有害物质、非法添加物、微量药物及其代谢物的色谱-质谱分析，宜采用标准曲线法。
准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。因此，必须完整地验证和记录应用的生物分析方法，以获得可靠的结果。分析方法验证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性。此外，方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。分析方法验证包括完整验证、部分验证和交叉验证。一般应对每个新分析方法和新分析物进行完整验证。在对已被验证的分析方法进行小幅改变情况下，根据改变的实质内容，可能需要部分方法验证。应用不同方法从一项或多项试验获得数据，或者应用同一方法从不同试验地点获得数据时，需要互相比较这些数据时，需要进行分析方法的交叉验证。
在一个生物样品定量分析方法的完整验证中，主要考察的项目有：1.选择性：指基质中存在非相关物质的情况下，准确测定分析物的能力；2.标准曲线与定量范围：标准曲线反映了分析物浓度与仪器响应值之间的关系。3.特异性：特异性是指在样品中存在相关干扰物质的情况下，分析方法能够准确、专一地测定分析物的能力。4.精密度与准确度：应选择至少5个浓度的质控样品进行准确度、精密度以及方法总误差考察。包括定量下限浓度、低浓度质控、中浓度质控、高浓度质控以及定量上限浓度质控。5.稀释线性：在标准曲线定量范围不能覆盖预期样品浓度的情况下，应使用质控样品进行方法的稀释线性考察，即评价样品浓度超过分析方法的定量上限时，用空白基质将样品浓度稀释至定量范围内后，方法能否准确测定。6.回收率：通过比较提取过的常规质控样品与提取空白基质样品添加分析物和内标溶液的质控样品（也称回收率样品）的仪器响应来计算分析物和内标的回收率。7.样品稳定性：稳定性考察应包括室温或样品处理温度下的短期稳定性、冻-融稳定性、台面稳定性、方法中储存条件的稳定性、长期冷冻储存的稳定性等等。8.残留：方法验证前要考察残留并尽量减少，并在验证批次的评价中对残留进行考察。
GLP(Good Laboratory Practice)又称药物非临床研究质量管理规范，指有关非临床安全性评价研究机构运行管理和非临床安全性评价研究项目试验方案设计、组织实施、执行、检查、记录、存档和报告等全过程的质量管理要求。实施GLP的实验室试验主要类型是毒性研究、致突变性研究、物理-化学实验、临床化学分析和测试、残留实验等与安全性相关的实验；实施GLP的目的确保实验结果的准确性和可靠性，最重要的是实现实验数据的相互认可(MAD)。主要技术规范共有10节：1.试验机构的组织和人员的职责；2.质量保证计划，要求试验机构应有书面确切的质量保证计划和专职的质量保证人员；3.设施,试验系统设施应具有适当的面积、结构和场所以满足研究需求，并将影响研究有效性的干扰因素降到最低；4.仪器、材料及试剂；5.试验系统,包括物理-化学系统和生物系统；6.试验样品和参照物；7.标准操作程序是实施GLP的关键；8.研究的实施，规定了对研究计划的基本要求、研究计划具体的内容、研究的实施要求；9.研究结果的报告；10.记录和材料的存储与保管，规定了需要存档的记录和材料的种类、保留期限、材料质量、有序存储和取阅要求。本次实验将在GLP规范条例下，进行beagle犬血浆中未知药物浓度的含量分析及分析方法学验证。
四、参考文献：
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