开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、研究目的及意义
在生物体系的脂质过氧化反应中通过脂过氧化物的降解产生了许多醛,有些醛具有很高的细胞毒性并能大范围地抑制细胞功能。醛类化合物不仅在脂过氧化物的裂解中产生,在生物体系中也存在着大量的醛的产物。脂质过氧化过程中发生的ROS氧化生物膜的过程,即ROS与生物膜的磷脂、酶和膜受体相关的多不饱和脂肪酸的侧链及核酸等大分子物质起脂质过氧化反应形成脂质过氧化产物,如丙二醛,和4-羟基壬烯酸,从而使细胞膜的流动性和通透性发生改变,最终导致细胞结构和功能的改变。因此,通过体内活性醛的含量测定即可以检测人体疾病。
活性醛本身的紫外吸收很弱,对活性醛的分析多采用衍生方法,使其有较强的紫外或荧光吸收以利于检测。有关测定微量醛的高效液相色谱(HPLC)衍生方法,近年陆续有报道,其中在提高衍生反应转化率、缩短反应时间、降低衍生反应温度以利于保持醛结构的完整性等方面,都还有待于进一步改进和提高。
由于活性醛具有较弱的紫外吸收,采用了一种与醛有高反应活性的新型紫外、荧光衍生试剂芴甲氧羰基肼(Fmoc-hydrazine)对醛进行衍生。利用液相色谱技术对衍生产物进行了分析。
本课题拟采用Fmoc-Cl为原料制备Fmoc-肼,用Fmoc-肼作为衍生化试剂,测定活性醛类化合物。
二、研究内容
本实验采用Fmoc-Cl为原料制备Fmoc-肼,通过芴甲氧羰基肼(Fmoc-hydrazine)柱前衍生化HPLC法,采用化学衍生技术,接入强紫外吸收基团,转化成强紫外吸收衍生物,选用较为广泛的紫外检测器,以此建立活性醛类化合物的含量测定方法,操作方便准确,方法灵敏,具有很大的实用价值。
三、文献综述
在生物体系的脂质过氧化反应中通过脂过氧化物的降解产生了许多醛,有些醛具有很高的细胞毒性并能大范围地抑制细胞功能Esterbauer是最初分析醛类化合物的。醛类化合物不仅在脂过氧化物的裂解中产生,在生物体系中也存在着大量的醛的产物。检测醛类化合物最通用的实验方法是依据醛和二硝基苯肼反应生成二硝基苯腙,由色谱法分离得到。生物体系中不仅存在游离的醛类,还有一些醛结合了部分的磷脂。Comporti等人用烯夫试剂也从经溴苯中毒的小鼠肝脏中检测到了和蛋白结合的醛。对游离的醛类检测,Tomira和Yoshino依据反应中生成了可以发荧光的十氢吖啶衍生物提出了一个很灵敏的检测方法,该衍生物可以由HPLC分离得到它比二硝基苯麟法灵敏得多,但缺乏特征性。在众多的醛中,人们研究得最多的是丙二醛(MDA),MDA是脂质过氧化的终产物之一,它通过初级、次级产物裂解形成的,在低pH值和高温度下,可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成一种粉红色生色团,该物质的组成是MDA:TBA=1:2,可以在532nm波长下测得,该方法操作简单灵敏,但也存在着一些缺点,首先TBA法检测到的MDA并不是完全由脂质过氧化产生的,许多也是在酸加热阶段由过氧化物裂解产生的,一些过渡金属离子此时也可以起到催化作用,其次TBA反应严格说来对MDA并不具有专一性,对一些脂过氧化物衍生物的分解产物也起反应本身不仅仅只与TBA反应,它也是代谢分解的底物。另外许多因素都可以调节MDA的产生,如实验中加入的H2O2,抗氧化剂和一些络合剂以及该反应中的酸的种类和浓度对此都有影响。上述缺点中,有些还是可以克服的,如在与酸加热之前体系中加入丁基化羟基甲苯(BHT)可以抑制加热过程中MDA的产生,用荧光法检测TBA-MDA复合物比TBA法误差小,并且很灵敏。
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