大鼠血浆中LUT的LC-MS测定方法研究文献综述

立题背景和意义：

1.研究背景

叶黄素(Lutein) , 又名植物黄体素, 是一种广泛存在于蔬菜、花卉、水果与某些藻类生物中的天然色素, 早在1995 年, 美国FDA 即已批准作为食品补充剂用于食品饮料。叶黄素具有良好的预防人体衰老、老年性黄斑区病变、白内障等功效, 因此在美国市场上十分畅销。在国际市场上, 1克叶黄素的价格与1克黄金相当, 所以人们把它称为植物黄金。

叶黄素是alpha;-胡萝卜素的衍生物, 分子式: C40H56O2, 分子量: 568.85, 没有VA 活性。它含有二个不同的紫罗酮环: beta;-和ε-紫罗酮环, 在各紫罗酮环的第3个碳原子上存在一个功能性羟基。

2.研究意义

叶黄素具有多方面药理作用，主要有两方面的药理活性。

（1）预防老年性黄斑区病变

在1985年和1993年, Bone等证实人体视网膜黄斑中的色素是叶黄素和玉米黄质。之后的研究也证实黄斑区的病变和叶黄素含量下降具有相关性。

（2）预防白内障

叶黄素和玉米黄质也是人体晶状体中存在的仅有的二种类胡萝卜素, 叶黄素和玉米黄质没有VA 原活性, 这说明它们对眼睛的保护机制可能与维生素A 不同, 目前推测为通过抗氧化和吸收接近紫外线的绿光实现保护作用。

叶黄素有其它类胡萝卜素不具备的生理功效，故极具商业开发价值， 但目前，对其在体内的药动学特点不明确，国内外研究报道尚不多 。故研究叶黄素在体内的药代动力学特点具有重要意义。

国内外研究现状、本课题研究的主要内容、实验过程：

1.国内外研究现状：

关于叶黄素的分析方法，国内外主要有4种方法，分别是：紫外-可见分光光度、

HPLC、超临界色谱法、LC-MS。

（1）紫外-可见分光光度法：

如FAO /WHO[ 1 ] 的方法是一种操作简便的对万寿菊提取物中叶黄素含量进行分析的方法。样品无需皂化, 溶于环己烷：96% 乙醇=1：1 (体积比) 的混合溶液中, 在444nm下测吸光度值, 利用叶黄素在此混合溶液中的比吸收系数( k= 2900) 来确定叶黄素的含量。优点是不需要昂贵的仪器设备。缺点是不能完全排除其它与叶黄素吸收峰相近的类胡萝卜素的干扰，特异性和灵敏度都不高。

（2）HPLC：

Piccaglia[ 2] 等人采用C18柱, 以乙腈/甲醇( 9 ：1) 和乙酸乙酯为流动相, 用HPLC 的方法研究了不同品种的万寿菊花瓣和花萼的游离叶黄素。蔡 靳[3]等人在C30-HPLC 上应用ELSD 的条件对叶黄素进行定量测定，在10～100mu;g 范围内，全反式叶黄素的进样量与ELSD 峰面积之间在一定置信度上呈现线性关系。该方法优点为灵敏度高, 重现性好，定量范围宽。

（3）超临界色谱法( SFC)

惠伯棣 [4]应用反相C18固定相超临界CO2色谱对胡萝卜素、叶黄素和叶绿素的分离进行了初步的探索。证明了预装的反相C18柱可以作为正相固定相来分离这些化合物.。但是SFC 分析色素尚属于尝试阶段，可供借鉴的方法较少

（4）LC-MS

液质联用优点：人体血液中样品浓度较低，此方法可极大提高了分析方法的灵敏度。生物基质中有内源性物质的干扰，此方法可提高了分析方法的特异性和选择性。如Bre ithaupt [5] 分析了国际市场上提供叶黄素素和玉米黄质的新型产品的成分, 利用HPLC 的方法对全反式叶黄素进行定量分析, 并用HPLC - ( APC I) - MS 的方法,定性分析了叶黄素油树脂中的二酯。

2.本课题研究的主要内容

（1）建立液相色谱－质谱法测定血浆中LUT浓度的方法；

（2） 研究口服制剂在大鼠体内的药动学。

3.主要实验过程如下：

（1）分析方法的选择

由于生物样品中所含药物或其活性代谢产物浓度较低，内源性物质干扰多，样品量又较少，所以分析方法应有较高的灵敏度和选择性。所以选择HPLC-MS作为分析手段。

（2）分析方法的选择和确证

调整色谱柱、流动相及其流速、检测波长、柱温、进样量、内标物质的选择、浓度及其加入量等条件，使其具有良好的色谱参数，并具有适当的保留时间以避开内源性物质干扰。

在实验过程中判断定量范围、特异性、精密度、准确度、回收率的优劣，最终确证方法。

（3）药代动实验

（4）数据的处理

参考文献

[1] FAO /WHO press. Compendium of food additive specifications [M ] , 1990, 52 ( 9 ) : 105- 106.

[2] P iccaglia, R. , Marotti M. , Grand ,iS. Lutein and luteinester content in d if frenttypes of Tagetespatula and Terecta[ J] . Indus trial Crops and Products, 1998, 8: 45- 51.

[3] 蔡 靳，惠伯棣，等．蒸发光散射检测器在叶黄素HPLC定量分析中的应用[J]．食品科学，2008，29(10)：508511

[4] 惠伯棣. 胡萝卜素、叶黄素和叶绿素在反相超临界色谱中的分离初探[ J] . 食品科学, 2005, 26 ( 8) : 162 - 165.

[5] Breithaupt, D. E. , Schlatterer, J. Lutein and zeaxanth in innewd ietary supp lements anaylsis and quantification [ J] . Eur. Food Techno.l , 2005, 220: 648- 652.