开题报告1.研究目的脑缺血是临床常见的脑血管疾病之一，且在脑组织恢复供血以后会导致再灌注损伤。
根据研究数据显示，脑缺血发病有明显的昼夜节律特性，其中早晨为脑缺血的发病高峰期。
昼夜节律是机体内的生物钟系统控制，哺乳动物控制昼夜节律的时钟基因位于下丘脑视交叉上核( suprachiasmatic nucleus，SCN ），如 rPer1 、rPer2和Bmal1的与节奏有关的基因均位于SCN上。
在这些时钟基因调控下，人体各系统的生理活动均具有明显的昼夜节律性。
本课题采用线栓法制备不同时间点的小鼠大脑中动脉栓塞（ MCAO ）模型，探讨昼夜节律对小鼠脑缺血再灌注的影响及时钟基因表达的作用机制。
2.拟研究的问题昼夜节律对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经损伤及脑梗死面积的影响，和时钟基因在不同时间表达对再灌注的影响。
3.研究手段及方法2.1.通过查阅文献和总结课题组前期实验情况，学习并熟练小鼠大脑中动脉栓塞（ MCAO ）模型复制方法和时钟基因表达测定方法；2.2.小鼠大脑中动脉栓塞（ MCAO ）模型制备：小鼠麻醉后，处于仰卧位，用剃毛机将颈部毛剃干净且不能有伤口，同时栓线取出备用。
将小鼠眼睛抹上一层凡士林，仰卧位用胶带固定在加热垫上，将右侧颈总动脉（common carotid artery，CCA）与迷走神经拨开，并打上活结，往上沿CCA轻轻分离颈内动脉(internal carotid artery,ICA)及颈外动脉（external carotid artery,ECA）后，对ECA进行结扎处理，于ECA分叉处向头端约3 mm打两个死结，并在ICA上打上一个活结，用胰岛素针在ECA上靠近分叉的打结处作一切口，缓慢将线栓插入，用电凝笔烧断两个死结中间血管，使ICA和ECA形成一条直线，然后将线栓插入到ICA，当线栓进入深度距离9～10mm 时感到阻力，用预留于ICA的活结固定线栓，最后结扎ECA，缺血1h。
2.3.行为学评分，评价神经损伤；TTC染色，测定脑梗死体积；wstern-blot测定不同时间点时钟基因的表达。
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