基于羊毛甾醇与环氧化鲨烯比值的环氧化角鲨烯环合酶（OSC）活性评价方法的建立
一、研究意义及国内外研究现状
高胆固醇血症是硬化性血管疾病发生发展的主要诱因，胆固醇水平的降低能够减少心血管疾病的发病率和死亡率。降低胆固醇生物合成的速率是治疗血浆胆固醇水平升高的有效方法。目前基于这一治疗机理的化合物只有HMG-CoA还原酶抑制剂，即胆固醇生物合成的早期抑制剂——他汀类药物，这类药物抑制胆固醇合成过程的限速酶———HMG-CoA还原酶，被广泛的用于治疗胆固醇升高。尽管该类药物耐受性好，但是用药导致的其他非甾体中间体的降低会产生临床的不良反应，且他汀类药物目前还无法使病人获得理想的LDL-胆固醇浓度。因此迫切需要研究作用于胆固醇生物合成后期的酶的化合物，既能抑制胆固醇生物合成，又能维持一些重要的非甾体物质的合成。
环氧化角鲨烯环合酶在胆固醇的生物合成过程中有双重作用，为治疗高胆固醇血症提供了一个新的靶点。它可以催化环氧化鲨烯环合成羊毛甾醇，催化2,3;22,23-二环氧化鲨烯环合成24(S),25-环氧化羊毛甾醇，随后转变为24(S),25-环氧化胆固醇。24(S),25-环氧化胆固醇是肝X受体（LXR）一种有效的天然配位激动剂。而LXR的激活可以增强许多调节细胞内脂代谢的基因的表达（具体过程见图一）。所以，抑制环氧化角鲨烯环合酶可以降低血浆中LDL-胆固醇的水平，防止胆固醇在巨噬细胞中积聚。
有特殊酶抑制剂的酶抑制作用可能导致不同物质的聚积，聚积的物质被识别，可以作为酶抑制作用的标志物。环氧化角鲨烯环合酶可以催化环氧化鲨烯环合成羊毛甾醇，因此本实验通过比较经化合物OA刺激和未经化合物OA刺激的HL60细胞中环氧化鲨烯和羊毛甾醇含量的比值来探究化合物OA对环氧化角鲨烯环合酶（OSC）活性的抑制作用，为寻找以胆固醇生物合成后期酶为靶点的化合物提供可借鉴的研究思路。
对胆固醇生物合成后期抑制的研究，目前多用TLC或HPLC将积聚的物质分离后用使用闪烁计数器研究。稳定同位素法也被用于胆固醇生物合成的研究。但是，TLC法分辨能力较低，而HPLC法较费时。且这两种方法都无可避免要使用放射性物质，无法获得聚积甾醇的结构信息。虽然LC-MS也是一种合理的方法，而且可以直接测定胆固醇，无需衍生化。但是LC-MS与GC-MS相比分辨率较低。此外，LC-MS质谱图有时较难解析，含有的结构信息较少，且没用标准谱库进行比对。与LC-MS相比，GC-MS在分析活泼物质的时候，虽有样品容易降解的缺点，但是GC-MS可以很好地分离积聚的甾醇类物质，且富含丰富结构信息的质谱图可以与标准谱图库如NIST相比较，有利于识别积聚的甾醇类物质。故本实验中选用GC-MS方法对样品中环氧化鲨烯和羊毛甾醇含量进行测定。
图一、胆固醇生物合成途径和氧甾醇合成交替途径
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