开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一，关键词：
USP家族 shRNA 质粒构建 细胞转染 RT-PCR
二，拟解决的问题：
泛素-蛋白酶途径是真核细胞中具有高效和高度选择性的特异性降解蛋白质的重要途径，广泛参与机体多种代谢活动。泛素特异性蛋白酶（USPs）通过去泛素化修饰可抑制蛋白的降解，延长胞内特异性蛋白的寿命,将shRNA导入细胞内干扰泛素化的途径，保证包内蛋白的寿命。研究发现，神经生长因子NGF和BDNF可以促进神经元的生长，抑制神经元的凋亡本课题以腺病毒为载体构建USP蛋白家族的shRNA库，并采用细胞转染技术鉴定质粒的干扰效率，从而用于探究NGF和BDNF调控神经元功能发挥的内在机制。
三，采用的研究手段
本课题以腺病毒为载体构建USP蛋白家族shRNA库，采用了RNA干扰技术，通过shRNA引物的设计，分子克隆技术构建质粒，将质粒转化入大肠杆菌的方法，再运用质粒的提取技术以及基因测序获取目的菌株，再通过细胞转染，RNA的提取，cDNA文库的构建以及RT-PCR等技术来鉴定其干扰效率。
RNAi概述：RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。简单的说是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默，是一种特异性的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing and transgene silencing)。由于RNAi具有高度的序列专一性和有效的干扰，可以特异地将特定的基因沉默，从而获得基因功能丧失或基因表达量的降低，因此可以作为功能基因组学的一种强有力的研究工具。RNAi技术可广泛应用到包括功能学，药物靶点筛选，细胞信号传导通路分析，疾病治疗等，shRNA是RNAi的类别之一。
shRNA干扰载体构建：短发卡RNA (shRNA) 是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA (siRNA, 19-21个核苷酸的RNA 双链)的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA (shRNA)序列并将其克隆到特定载体上。
cDNA文库构建：ｃＤＮＡ文库是以特定的组织或细胞 ｍＲＮＡ为 模板，逆转录形成的互补ＤＮＡ 与适当的载体（常用 噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌形成重组ＤＮＡ克隆群，这样包含着细胞全部 ｍＲＮＡ信息的 ｃＤＮＡ克隆集合称为该组织或细胞的 ｃＤＮＡ文库。cDNA文库的构建是一种重要的基因克隆的手段,主要用于新基因的发现及基因功能的研究。
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