一、拟研究或解决的问题:
本课题拟在前期研究基础上,采用小鼠冠状动脉左前降支结扎诱导心肌缺血再灌注损伤模型,探讨生脉散活性成分群对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。
二、采用的研究手段:
1 心肌缺血再灌注损伤小鼠模型制备
4%水合氯醛麻醉小鼠,仰卧位固定,胸部剪毛,碘酒-酒精消毒皮肤。连接人工呼吸器(潮气量3ml,呼吸比2:1,心率110),连接BL-420S生物机能实验仪进行心电图监视。参考文献方法制作小鼠心肌缺血再灌注模型。在胸骨左侧与胸骨平行作一纵行切口(1.2 cm),打荷包结。切开皮肤,钝性分离胸大肌,暴露第四根肋骨,从第四根肋骨处用止血钳打开胸腔,暴露心脏,轻压胸廓即可将心脏挤出胸腔外。在心脏挤出后用左手的拇指和食指夹住鼠心,心尖指向头侧稍偏右。用6-0号丝线,从肺动脉圆锥左缘进入,从此进入点和左心耳根部假想联线的中间穿出,连同线穿过的心肌一并结扎(活结),结扎完成迅速放回胸腔,留线头在胸腔外以便再灌,挤出气体并缝合。30 min后,轻拉留在外的线头,解开活结再灌注。
2 TTC染色法测定心脏梗死面积
再灌24 h后,眼眶取血室温静置10 min后,以2500 rpm的转速离心10 min,取上清液,取血后摘取心脏,置于负20摄氏度冰箱冷冻20 min,取出后至结扎处到心尖,切2 mm左右的薄片,4片。将切片放入培养皿,倒入1%TTC染液,避光37摄氏度孵育15 min,取出拍照记录。应用图像分析系统Image J测量心肌梗死面积,S=TTC neg-LV area/ total area,并用plusmn;SD的形式表示。
3 小动物高频彩色超声(US)测定心脏功能
4%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠,仰位,利用Visual Sonics Vevo2100小动物专用高频彩色超声仪,测定各组小鼠心脏射血分数(EF)、缩短分数(FS)、左室间隔厚度(IVS;d)、左室内径(LVID;d)、左室后壁厚度(LVPW;d)、校正后左室质量(LV Mass corrected)、左室体积(LV Vol;d)。
4 试剂盒测定血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性、及丙二醛(MDA)的含量
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