开题报告内容：
拟研究或解决的问题
肝素酶I是一种特异性作用于肝素或类肝素主链糖苷键的多糖裂解酶，可用于制备低分子肝素以达到良好的抗凝血、防血栓形成的作用，相较于化学降解法具有效率高、成本低、产物均一性好、不容易引入有机溶剂或引起杂质残留等优点。本课题尝试优化肝素酶I在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中的重组表达条件，对诱导时机、温度、时间、诱导剂剂量和纯化条件进行探索，以期能够得到大量纯度较高、活性良好的肝素酶I，最终建立可靠的肝素酶I表达和纯化体系。
采用的研究手段
本试验首先从F.heparinum中获取HepI基因，将其克隆到表达载体pET-28a中获得N-端含His标签的肝素酶I表达载体，转化到大肠杆菌BL21中，从而获得表达工程菌株进行肝素酶I的异源表达。通过对诱导时机，温度，时间和诱导剂浓度的考察，探索最佳的诱导表达条件。之后，采用镍柱亲和层析法对肝素酶I进行初步纯化，并通过SDS-PAGE凝胶电泳考察肝素酶I的纯化效果，以便获得纯度和酶活均较高的肝素酶I。
文献综述
肝素酶I的异源表达及纯化
- 肝素酶I的介绍及研究现状
肝素酶I（heparinase I，简称Hep I）是三种从肝素黄杆菌中分离得到的多糖裂解酶之一，可以降解肝素或硫酸乙酰肝素二糖重复单元中的1，4-糖苷键，因其相较于heparinase Ⅱ和heparinase Ⅲ具有更高的底物专一性和酶活性，而被广泛应用于低分子肝素（LMWH）的工业制备、体外血液循环中肝素的清除以及类肝素物质的结构分析[1-3]。肝素酶I的基因是一段1152 bp的开放阅读框,编码43.8 kDa的前体蛋白[6]。酶所含有的基本序列结构如图1[4]所示，表达蛋白的糖基化位点在Ser39，连接一个相对分子量为1.1times;10 3的糖链；Cys是酶维持催化活性所必须的氨基酸之一[14]，此外还有一系列His和Lys对其活性表达起至关重要的辅助作用；Ca 2 离子是激活肝素酶I的重要离子，因此其上有一个钙结合位点[10]；若溶液中含有Cacl2，可以减缓酶在冻融过程中的活性降低现象，起到稳定和保护的作用[4]。
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