开题报告内容：
拟研究或解决的问题及主要研究内容
肝素是由葡萄糖胺及葡萄糖醛酸二糖单元所组成的复杂糖胺聚糖，作为天然抗凝剂已有近80多年的历史，但由于广泛的使用，其适应症也不断增加，因此，将肝素降解为低分子量肝素成为提高肝素类药物安全性的有效途径之一。低分子量肝素以其出血风险小、肝素诱导血小板减少症减少等低副作用，已广泛作为临床抗凝血的首选药物。前期本课题已通过光学控制肝素酶III方法获得平均分子量低于5000且分布相对集中的新型低分子量肝素，在此基础上，本研究通过利用光学酶法大规模制备新型低分子量肝素，并进行其体外活性的检测。
（1）新型低分子量肝素的制备
菌体培养：用250mL的锥形瓶在37℃，220rpm的条件下培养种子液50mL,连续培养12个小时后，转接到1L的锥形瓶中，发酵200mL，37℃，220rpm条件下培养至OD=1.0。然后加IPTG诱导，在16℃，220rpm条件下继续发酵培养10小时后收菌。
蛋白纯化：利用镍离子亲和层析柱进行分离纯化，先将破菌上清液与镍柱结合，然后用不同浓度的咪唑和PBS缓冲液洗脱。
聚合体-蛋白接合：鉴于蛋白质的半胱氨酸化学修饰特异性强，以迈克尔加成方式将光敏聚合物末端的乙烯砜基与酶活性中心附近的半胱氨酸上的巯基结合。
光控调控活性：通过考察紫外/可见光照强度、光照时间、光照距离等因素，分析对酶分子开关的影响，比较在调节过程中酶对多糖底物的裂解情况以判断开关的裂解反应活性，检测酶分子开关响应的灵敏度。同时摸索体外光控酶解肝素的循环体系，以期最大限度利用光敏开关调节肝素酶的催化裂解肝素，实现光学可逆精准控制肝素酶Ⅲ活性速率。
（2）新型低分子量肝素的抗凝血活性
a.体外抗凝血实验：利用抗凝血试剂盒测定体外抗FⅩa与抗FⅡa活性，考察新型低分子量肝素的抗凝血活性，并与商品化低分子量肝素进行比较，阐明新型低分子量肝素抗凝血活性的增效功能。
b.体内活性剂抑制出血情况：利用新型低分子量肝素处理SD大鼠，检测各种凝血指标水平的变化差异，同时考察给药前后大鼠血量流失情况，阐释其体内抗凝活性及减少出血情况。
文献综述
1.肝素的来源
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