拟研究的问题（课题背景）：1型糖尿病是一种自身免疫性疾病，是由于自身反应性T细胞对胰岛素产生细胞--胰岛beta;细胞进行选择性攻击致使beta;细胞遭受破坏、胰岛素分泌不足而发生的疾病。
有研究认为，一些自身抗原比如胰岛素、谷氨酸脱羧酶（GAD）、酪氨酸磷酸酶（IA2）和热休克蛋白60（Hsp60）等是引起自身免疫的靶抗原，因此，在自身免疫反应前期给予一定数量的自身抗原进行免疫耐受即可以达到预防T1MD的目的。
本课题研究的重点在于通过基因工程方法得到Hsp65蛋白用以抗糖尿病疫苗的研究。
本实验室已构建表达Hsp65蛋白的工程菌，但由于Hsp65具有易降解的特性，分离纯化过程需保持全程低温，操作条件苛刻，因此，我们设想缩短纯化时间以避免纯化过程中蛋白的降解，带有组氨酸标签的蛋白在进行蛋白镍离子柱过滤时易结合在镍柱上，蛋白纯化工艺操作简单，因此，在HSP65前加入HIS组氨酸标签，利用镍柱亲和层析来纯化蛋白。
然而现有的P277 多肽是由人工合成的, 其成本高、 产量低, 限制了大规模药效学的研究。
拟用重组融合蛋白法生产P277 多肽,并用P277 多肽免疫NOD 小鼠,探讨其对自发性糖尿病小鼠的保护效果,以评价其对人Ⅰ型糖尿病的预防作用。
研究手段：在实验室已有克隆PET28a-his-hsp65-6p277的基础上，利用PCR的方法获得his-hsp65的目的基因，选择合适的载体PET-28a，构建基因重组质粒，将该质粒转入E.coli BL21，使其能够在细胞内正确高效表达，通过破碎细胞并且利用亲和层析的方法高效纯化目的蛋白。
实验过程中，利用到DNA重组技术（包括PCR技术、基因克隆、DNA电泳分析）、微生物培养技术、蛋白亲和层析的相关操作。
文献综述人自身含有热休克蛋白60，当免疫耐受出现缺陷的时候，Hsp60与T细胞上的toll样受体4结合激活CD8T细胞，同时hsp60的表位还被巨噬细胞识别，巨噬细胞引发炎症反应，beta;细胞由于细胞毒性和炎症因子的作用出现损坏，导致胰腺病变。
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