开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、研究背景
多肽是 alpha;—氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物,也是蛋白质水解的中间产物。天然的活性多肽主要是从胞质、体液、内分泌腺组织器官或生物细胞中产生或分泌的。生物活性多肽的生物学功能广泛,包括神经调节、免疫调节、酶调节、抗高血压、抗氧化和降血脂等,可开发成药物或药物前体,效果好、来源丰富且使用安全。因此在医药的研发中,多肽已经日渐成为热点。自然界的动物、植物和微生物中广泛存在着各种功能的多肽,但其原料组成复杂使得多肽的分离纯化成为一个研究热点。溶媒、沉淀、萃取等以往的分离纯化技术,耗时较长、操作复杂、产品回收率低且易失活,近年来随着分离技术和多肽鉴定方法等研究深入,超滤法、离子交换法、高效液相色谱(HPLC)法、高效毛细管电泳(HPCE)法等为从自然界获取对于人类有利的多肽及蛋白质做出极大贡献。
二、研究的目的与意义
- 针对目前繁重且杂乱的分离纯化多肽的方法,力图寻找一整套行之有效的从复杂体系中分离纯化特定多肽的手段。
- 根据不同复杂体系中目的多肽的种类和性质不同,构建多肽分离纯化方法数据库( 包括: 色谱、层析、电泳等方法) ,同时描绘目的多肽图谱,利于今后的分离纯化和对比分析。
三、实验内容
- 实验思路
生物体内含有多种物质,是个庞大的复杂体系,包括核酸、蛋白质、糖类、脂类、多肽、氨基酸及小分子盐类等,要从中提取目的多肽,可根据多肽的分子量及带两性电荷的性质。超滤是在一定压力下,利用超滤膜孔径大小对复杂体系中不同物质进行分级分离的一种加压膜分离技术,成本低廉,条件温和,无需添加其他试剂,不易引起活性多肽的失活。离子交换色谱技术主要是根据生物活性分子的带电性质和带电数量而进行分离的一种层析技术,其中阴离子交换柱可吸附带负电荷的物质,阳离子交换柱可吸附带正电的物质。
- 实验步骤:
⑴样品的制备
为模拟生物体内的复杂体系,称取已知的缩宫素,BF-30,依替巴肽,815134,胰岛素,BSA,胰蛋白酶,各组分分别配成1mg/ml的溶液,并配制混合溶液。
⑵超滤
将混合液体经10KDa的滤膜过滤,收集滤过液;加同等体积的蒸馏水洗脱滤膜,收集洗脱液。将收集得来的滤过液和洗脱液留样待检。
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