开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、课题的研究背景、意义和目的
课题研究的背景:
乳腺癌患者体内表皮生长因子受体2(HER2)基因的扩增所导致的蛋白过度表达使乳腺癌对常规的化疗等治疗方法反应性差。目前以HER2为靶点的治疗性抗体,由于其靶向性高,特异性强和安全性高,正在逐渐成为治疗HER2阳性乳腺癌患者的首选治疗方法。与此同时有研究表明治疗性IgG1抗体Fc片段的Asn297位糖基化的差异与抗体介导的细胞毒反应(ADCC)活性有关,基因敲除岩藻糖转移酶8基因(FUT8)可以显著降低IgG1抗体的岩藻糖修饰水平,并最终增加ADCC活性,提高抗体的治疗效果。本课题利用实验室前期构建的HER2抗体稳定转染细胞株和低岩藻糖HER2抗体稳定转染细胞株,进行扩大培养,收集细胞培养上清,进行分离纯化以及鉴定,用于后期HER2抗体活性的鉴定。
课题研究的目的:
通过学习细胞生物学和生物化学等相关实验技术,进行哺乳动物细胞的大规模培养并收获含HER2抗体的细胞培养上清;通过Akta等分离纯化设备学习蛋白质的分离纯化过程;通过电泳以及免疫印迹法进行蛋白质的鉴定。
课题研究的意义:
通过学习细胞培养,蛋白质分离纯化以及蛋白质初步鉴定过程,熟悉重组生物技术药物制备的一般过程。
二、课题研究的主要内容
1. HER2抗体稳定转染细胞株的培养和抗体的表达
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